Bugüne kadarki CRISPR eyleminin en büyük çalışması, CRISPR-Cas9 gen düzenlemesinin bir hücreye uygulanabilmesi için kesin mutasyonları öngören bir yöntem geliştirdi. Wellcome Sanger Enstitüsündeki araştırmacılar, 40.000 farklı DNA parçasını düzenlediler ve gen düzenlemesinin etkilerini ortaya çıkarmak için bin milyon sonuçtaki DNA dizisini analiz ettiler ve sonuçları tahmin eden otomatik öğrenme aracı geliştirdiler. Bu, hastalık mekanizmalarını ve ilaç hedeflerini araştırmak için CRISPR-Cas9 kullanan araştırmacılara yardımcı olacaktır.
Bu çalışma, bilim insanlarının CRISPR-Cas9 gen düzenlemesini daha güvenilir ve dolayısıyla daha ucuz ve daha verimli hale getirmek için en iyi dizileri hedeflemelerini sağlayacak.
CRISPR-Cas9, araştırmacıların genomdaki herhangi bir pozisyonda DNA’yı kesmelerini, mutasyon oluşturma ve spesifik genleri kapatmasına olanak sağlayan bir gen düzenleme teknolojisidir. Bu hayati teknoloji, dünya çapındaki bilim insanları tarafından, hangi genlerin, kanserden nadir hastalıklara kadar, çeşitli koşullar için önemli olduğunu araştırmak için kullanılmaktadır. Aynı zamanda insanların genlerindeki zararlı mutasyonları düzeltmek için terapötik olarak denenmektedir.
Spesifik bir kılavuz RNA, DNA’yı doğru yerde kesmek için Cas9 ‘makas’ını yönlendirerek tam bir hedef DNA dizisine bağlanır. Bununla birlikte, nihai mutasyonların ne olacağını tam olarak tahmin etmek zordur. Çünkü hücre kırılmayı onararak, DNA’nın iki kesik ucunu yeniden birleştirdiğinde daha fazla değişiklik meydana gelir.
Bunu incelemek için araştırmacılar, 40.000’den fazla farklı hedef DNA ve kılavuz RNA çifti oluşturmuş ve CRISPR-Cas9 gen düzenlemesini gerçekleştirmiştir. Farklı hücrelerdeki her bir çiftin derin sekansıyla, DNA’nın nasıl kesilip yeniden birleştiğini detaylı bir şekilde analiz edebildiler. Onarımın, DNA ve kılavuzun tam dizisine bağlı olduğunu buldular ve aynı dizide tekrarlanabileceğini keşfettiler. Araştırmacılar daha sonra onarımın sonucunu belirlemek için genel kurallar oluşturan bir makine öğrenimi hesaplama aracı oluşturmak için çok fazla sayıda dizi verisini kullandılar. FORECAST adı verilen bu program, tek başına hedeflenen DNA dizisini kullanarak onarılan diziyi tahmin etmelerini sağladı.
Wellcome Sanger Enstitüsü’nden Dr. Luca Crepaldi: “Bugüne kadarki en büyük, kapsamlı CRISPR-Cas9 eylemini gerçekleştirdik ve binlerce milyondan fazla DNA dizisini analiz ettik. İşlemi inceledik. Hücre mekanizmalarının hareketinin tekrarlanabilir olduğunu kanıtlayan spesifik hedef dizilerin hücre tarafından da aynı şekilde onarıldığını gösterdik.”
Wellcome Sanger Enstitüsü’nden Dr. Felicity Allen, “CRISPR-Cas9 düzenlemesinden sonra tekrarlanabilir DNA onarımının keşfinin, oluşturduğumuz çok sayıda dizi verisi ile birleşmesi, makine öğrenimini kullanarak bir tahmin aracı oluşturabileceğimiz anlamına geliyordu. Bizim kaynağımız, CRISPR-Cas9 gen düzenlemesinden elde edilen kesin mutasyonları, sadece hedef DNA’nın sekansından tahmin edebilir. Gelecek CRISPR-Cas9 uygulamaları için zaman ve kaynak tasarrufu sağlayacaktır. Aynı zamanda sağlık ve hastalıkları incelemek için gen kurgulamayı kullanan tüm araştırmacılar tarafından kullanılacak bir yöntemdir. “
Wellcome Sanger Enstitüsü’nden bir diğer araştırmacı Dr Leopold Parts: “CRISPR-Cas9, araştırmalar ve ileriye dönük terapötik amaçlar için DNA’ya mutasyonların dahil edilmesi için son derece önemli bir sistemdir. Araştırmamız bilim adamlarının çalışmalarını çok daha iyi anlamalarına izin veriyor ve dönüşümsel yöntemimiz, insanların her CRISPR-Cas9 düzenlemesinin bir hücredeki etkilerini tahmin etmelerini sağlıyor. Bu düzenleme deneylerin daha iyi tasarlanmasını sağlar ve gelecekteki terapötik uygulamalara yol açabilir. “